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广灵驴SCD 基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析

2024-02-28 来源：华拓网

J.SHANXIAGRIC,UNIV.（NaturalScienceEdition）

学报（自然科学版）2021，41（2）:065

关家伟，孙瑜彤，邱丽霞，等.广灵驴SCD基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析［J］.山西农业大学学报（自然科学版），2021，41（2）：65-73.

GuanJW，SunYT，QiuLX，etal.Cloning，bioinformaticsandtissuedifferentialexpressionanalysisofSCDgeneinGuan⁃glingdonkey［J］.JournalofShanxiAgriculturalUniversity（NaturalScienceEdition），2021，41（2）：65-73.doi：10.13842/j.cnki.issn1671-8151.202012006

04011

广灵驴SCD基因克隆、生物信息学及组织差异表达分析

关家伟1，孙瑜彤1，邱丽霞1，李武峰1*，杜敏2*（1.山西农业大学生命科学学院，山西太谷030801；2.美国华盛顿州立大学动物科学系，华盛顿州普尔曼99164⁃6310）

摘要：［目的］本试验旨在对广灵驴SCD基因CDS区进行生物信息学分析，并检测其在广灵驴组织中的表达，为探究

SCD基因在广灵驴脂肪沉积中的作用提供理论参考。［方法］设计SCD基因同源引物，RT⁃PCR法克隆CDS序列，对SCD基因编码产物进行生物信息学预测，同时使用qRT⁃PCR法检测广灵驴7个组织中SCD基因的表达量。［结果］广灵驴SCD基因CDS长1080bp，可编码359个氨基酸，提交到GenBank，获得登录号：MW132164。广灵驴编码序列与马、牛、双峰驼、猪、绵羊、人、小鼠、大鼠的同源性分别为99.4%、89.2%、90.7%、90.1%、89.5%、88.2%、81.2%、82.4%。SCD蛋白分子质量为41.55ku，等电点为9.29，不稳定指数为45.54，平均疏水指数为−0.146，属于不稳定的碱性亲水蛋白。SCD蛋白既没有信号肽也没有卷曲螺旋，有4个跨膜区，主要定位在内质网。二级、三级结构显示，SCD蛋白主要由α⁃螺旋（40.67%）和无规则卷曲（40.11%）构成。SCD基因在广灵驴7个组织内都表达，在肝脏、肺脏和皮下脂肪中的表达量最高，心脏和背最长肌最低。［结论］本研究结果可为今后探究SCD基因在广灵驴脂肪沉积中的功能，以及提高广灵驴乳肉品质奠定基础。

关键词：SCD基因；广灵驴；基因克隆；生物信息学分析；组织表达中图分类号：S822

文献标识码：A

文章编号：1671-8151（2021）02-0065-09

肌内脂肪（intramuscularfat，IMF）影响着畜禽的风味与嫩度，然而大量食用含高胆固醇、高脂肪的牛肉、猪肉等红肉容易产生肥胖和高血压［1］。驴肉的脂肪和胆固醇含量低，味道鲜美，是传统红肉的理想替代品［2］。硬脂酰辅酶A去饱和酶（stearo⁃yl-CoAdesaturase，SCD）是一种在内质网上催化合成单不饱和脂肪酸的关键酶。在脂肪合成中，SCD蛋白在棕榈酰CoA（C16∶0）和硬脂酰CoA（C18∶0）的第9和10碳原子间导入氢键，二者分别被转变为棕榈油酰CoA（C16∶1）和油酰CoA（C18∶1），这些产物是合成膜磷脂、胆固醇酯和甘油三酯（Triglyceride，TG）的底物［3］。Liu等［4］对鸡的胸肌样本进行RNA测序分析，SCD基因在高TG组的表达量高于低TG组，表明SCD可有效促进TG积累。Hudson等［5］通过筛选全基因组表达的方法对牛的IMF和皮下脂肪进行代谢与功能分析，结果

表明皮下脂肪中SCD基因表达量是IMF的2.4倍。Ros-Freixedes等［6］研究发现SCD基因g.2228T>CSNP可影响杜洛克群体的IMF含量。上述研究表明SCD基因可以影响动物脂肪的沉积，目前该基因在猪、鸡、牛和羊等动物均已被克隆研究，但在驴中少见相关报道。广灵驴俗称广灵画眉驴，属于中国四大驴品种，具有抗病耐寒、肉质鲜嫩、繁殖力强、出肉率高等特性［7］。本研究通过PCR技术扩增广灵驴SCD基因CDS区，对其进行生物信息学预测并检测不同组织中的表达量，旨在为SCD基因在驴肉脂肪沉积作用提供理论依据。

1.1

材料和方法

材料样本采集

10头3岁健康公驴来自山西省忻州市繁峙县

1.1.1

收稿日期：2020⁃12⁃03修回日期：2021⁃01⁃15基金项目：山西省重点研发计划（指南）项目：国际科技合作方面（201803D421022）；山西农业大学横向科技项目（2019HX78）作者简介：关家伟（1997-），男，硕士研究生，研究方向：动物分子遗传育种通信作者：李武峰，副教授，硕士生导师，E-mail：leewf1967@163.com；杜敏，教授，博士生导师，E-mail：min.du@wsu.edu*

田园毛驴公司，宰杀完采集新鲜心脏（右心室）、肝脏（左肝）、脾脏（脾后端）、肺脏（右肺）、肾脏（右肾）、背最长肌、皮下脂肪7个组织，经液氮冷冻后，−80℃冰箱保存。1.1.2

主要试剂

pGM-TFast克隆试剂盒、E.coliDH5α感受态细胞、DNA凝胶回收试剂盒均购于天根生化有限公司；反转录试剂盒（M5SuperqPCRRTkitwithGdnaremover）和荧光定量试剂盒（2×Real⁃timePCRSupermixSYBRgreen，withanti-Taq）均购于北京聚合美有限公司；2×EsTaqMaster⁃Mix（Dye）购自康为世纪公司；DNAMarker购自

表1

Table1

引物PrimersS1S2S3SY1β⁃actin

中科瑞泰有限公司。1.21.2.1

方法

引物设计与合成

根据GenBank中已公布的马（登录号：XM_001500364.4）、双峰驼（登录号：XM_010971047.1）、猪（登录号：JN613287.1）等物种的SCD基因mRNA序列设计同源引物，利用PrimerPremier3.0在线工具设计克隆引物（S1、S2和S3），利用GenScriptPrimerDesign在线工具设计荧光定量引物（SY1），β⁃actin为内参基因，引物信息见表1。设计的引物由生工公司合成。

广灵驴SCD基因引物序列

PrimersequencesforSCDgeneinGuanglingdonkey

序列（5′-3′）Sequence

退火温度/℃

Tm5858586060

产物长度/bpProductslength

480514455111100

用途Application克隆克隆克隆qPCR内参

F：ACCGAAGTCTTCCCTGTGTC；R：CGAGCTTTGTAAGTCCGGTGF：CGAGCTACCGGGATAAGGAG；R：ATGAAGCACAGCAACACGACF：TCGTGTTGCTGTGCTTCATC；R：CAGCTGGCTCTTGGAAAAGGF：TGTCGTGTTGCTGTGCTTCA；R：AGCACAAGAGCGTAACGCAAF：CGACATCCGTAAGGACCTGT；R：CAGGGCTGTGATCTCCTTCT

1.2.2RNA提取与基因扩增

测见表2。1.2.4

组织表达分析

运用qRT-PCR测定广灵驴7个组织中SCD基因的表达量。反应体系10µL：2×RealtimePCRSupermix5µL，cDNA模板1µL，上、下游引物各0.25µL，ddH2O3.5µL。PCR反应条件为：95℃10min，95℃15s，60℃1min，72℃20s，共40个循环。1.2.5

数据分析

通过2-ΔΔCt法分析SCD基因的表达量，运用GraphPadPrism8软件对差异表达进行单因素方差分析（One-WayANOVA）并绘图。

利用Trizol法从广灵驴7个不同组织中提取总RNA，检测RNA的浓度和纯度，合格后参考M5SuperqPCRRTkitwithgDNAremover说明书进行反转录合成cDNA，cDNA于−20℃保存备用。利用表1的3对克隆引物对SCD基因进行扩增（体系10µL）：2×EsTaqMasterMix（Dye）5µL，上、下游引物各0.4µL，cDNA1µL，ddH2O3.2µL。PCR反应程序：94℃预变性2min，94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，共34个循环；72℃终延伸2min；12℃终止反应。用1.0%琼脂糖凝胶电泳检验PCR产物的大小，用TIANgelMidiPurificationKit试剂盒提炼纯化目的片段；连接至PGM-T，之后转入到DH5α感受态细胞中，摘取菌落并用PCR检验后送至生工测序。1.2.3

生物信息学分析

2.1

结果与分析

SCD基因克隆及序列分析

利用设计的3对引物克隆SCD基因，克隆测

通过NCBIORFFinder工具对测序后的SCD基因进行开放阅读框（openreadingframe，ORF）分析。通过Clustalx、DNAStar等工具对SCD基因编码区进行多重比对和同源性分析，之后利用MEGA-X构建进化树。SCD蛋白生物信息学预

序后得到3段核苷酸序列。利用seqMan软件将3段序列拼接到一起，得到一条长1161bp的序列，上传到GenBank，获得登录号：MW132164。ORFFinder预测到SCD基因的ORF长1080bp，编码

表2

Table2

在线软件

氨基酸序列分析工具

Analysistoolofaminoacidsequence

网址Website

用途Application开放阅读框预测亲疏水性预测理化性质预测信号肽预测卷曲螺旋预测跨膜区预测亚细胞定位预测磷酸化位点预测N糖基化位点预测O糖基化位点预测二级结构预测三级结构预测结构域预测

OnlinesoftwareORFFinderProtScaleProtParamSignalP⁃4.1COILSServerTMHMM2.0PSORTIIPredictionNetPhos3.1NetNGlyc1.0NetOGlyc4.0SOPMASWISS⁃MODELNCBICDD

https：//web.expasy.org/protscale/https：//web.expasy.org/protparam/

https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/

http：//www.cbs.dtu.dk/services/SignalP⁃4.1/https：//embnet.vital⁃it.ch/software/COILS_form.htmlhttp：//www.cbs.dtu.dk/services/TMHMM/https：//psort.hgc.jp/form2.html

http：//www.cbs.dtu.dk/services/NetPhos/http：//www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc/http：//www.cbs.dtu.dk/services/NetOGlyc/

https：//npsa-prabi.ibcp.fr/cgi⁃bin/npsa_automat.pl？page=npsa_sopma.htmlhttps：//swissmodel.expasy.org/interactive

https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/docs/cdd_search.html

359个氨基酸（图1）。2.2

同源性比对

运用DNAStarMegAlign软件把广灵驴SCD基因的编码序列与GenBank中马（Equuscaballus，登录号：XM_001500364.4）、牛（Bostaurus，登录号：NM_173959.4）、双峰驼（Camelusbactrianus，登录号：XM_010971047.1）、猪（Susscrofa，登录号：JN613287.1）、绵羊（Ovisaries，登录号：NM_

001009254.1）、人（Homosapiens，登录号：NM_005063.5）、小鼠（Musmusculus，登录号：NM_009127.4）、大鼠（Rattusnorvegicus，登录号：NM_139192.2）的序列进行同源性比对，发现广灵驴与马、牛、双峰驼、猪、绵羊、人、小鼠、大鼠的同源性分别为99.4%、89.2%、90.7%、90.1%、89.5%、88.2%、81.2%、82.4%（图2）。

图1

Fig.1

广灵驴SCD基因CDS及对应氨基酸序列

CDSanddeducedaminoacidsequenceofSCDgeneinGuanglingdonkey

2.3系统进化树分析

运用MEGA-X软件将广灵驴SCD基因编码

果显示广灵驴和马的种属关系最近，和小鼠、大鼠的种属关系最远，其与编码序列同源性比对结果相一致。

序列与上述8个物种进行比对，并构建进化树。结

图2

Fig.2

广灵驴与8个物种SCD基因编码序列同源性比对

HomologyalignmentofCDSregionofSCDgenebetweenGuanglingdonkeyandeightotherspecies

图3

Fig.3

SCD基因编码序列系统进化树

PhylogenetictreeofCDSsequenceofSCDgene

2.42.4.1

生物信息学分析

SCD蛋白理化性质及亲/疏水性分析利用ProtParam在线软件预测SCD蛋白理化

卷曲螺旋，结果表明不存在卷曲螺旋。利用TMHMM2.0分析跨膜结构，发现SCD有4个跨膜区（图5B）。通过PSORTIIPrediction预测亚细胞定位，发现SCD蛋白主要分布在内质网（55.6%），质膜（33.3%）和分泌系统囊泡（11.1%）上也存在。2.4.3

蛋白修饰位点预测

通过NetOGlyc4.0、NetNGlyc1.0预测广灵驴SCD蛋白糖基化修饰位点，发现在第17、21和25位氨基酸处存在O-糖基化位点，在第259和318位存在N-糖基修饰化位点。利用NetPhos3.1预测磷酸化位点，结果表明SCD蛋白有10个丝氨酸（Ser）、10个苏氨酸（Thr）和4个酪氨酸（Tyr）磷酸化位点，共24个（图6）。2.4.4

二级和三级结构预测

利用SOPMA在线工具预测SCD二级结构，发现SCD蛋白有146个α-螺旋（40.67%）、144个无规则卷曲（40.11%）、52个延伸链（14.48%）和

性质，SCD蛋白分子式为C1931H2915N501O505S10，分子质量是41.55ku，脂肪指数是88.86，等电点是9.29，属碱性蛋白。不稳定指数是45.54，属于不稳定蛋白。氨基酸组成显示，SCD蛋白共包含20种氨基酸（表3），其中占比最高的是亮氨酸（Leu，L），占11.7%，最低的是半胱氨酸（Cys，C），仅占1.1%。

利用ProtScale分析广灵驴SCD亲/疏水性，发现225处亮氨酸（L）存在最大疏水值，为3.244，在64处甘氨酸（G）存在最小疏水值，为−2.978，平均疏水指数（GRAVY）为−0.146，属于亲水蛋白（图4）。2.4.2

信号肽、卷曲螺旋、跨膜结构及亚细胞定位运用SignalP-4.1分析SCD信号肽，发现SCD不存在信号肽（图5A）。通过COILSServer预测

表3

Table3

广灵驴SCD蛋白的氨基酸组成

AminoacidsofGuanglingdonkeySCDprotein

占比/%Percentage

7.85.83.13.91.11.45.05.64.54.7

氨基酸AminoacidsLeu（L）Lys（K）Met（M）Phe（F）Pro（P）Ser（S）Thr（T）Trp（W）Tyr（Y）Val（V）

个数Number422262119212192321

占比/%Percentage11.76.11.75.85.35.85.82.56.45.8

氨基酸AminoacidsAla（A）Arg（R）Asn（N）Asp（D）Cys（C）Gln（Q）Glu（E）Gly（G）His（H）Ile（I）

个数Number282111144518201617

肪酸去饱和酶（Delta9-FADS-like）结构域，属于膜脂肪酸去饱和酶超家族（Membrane-FADS-likesuperfamily）（图9）。2.5

SCD基因组织表达分析

通过qRT-PCR技术检测广灵驴7个组织中SCD基因的mRNA表达量，发现在7个组织内都检测到了SCD基因，表达量最高的是肝脏、肺脏和皮下脂肪，其次是脾脏和肾脏，心脏和背最长肌最

图4

Fig.4

广灵驴SCD蛋白疏水性分析

HydrophilicityanalysisofSCDproteininGuanglingdonkey

低（图10）。

17个β-折叠（4.74%）（图7）。使用SWISS-MOD⁃EL工具分析SCD三级结构，下载PDB文件后用PyMOL打开（图8），发现和二级结构结果相似。2.4.5

SCD蛋白保守结构域预测

利用NCBICDD分析SCD蛋白的结构域，发现该蛋白在第97~337位残基之间存在Delta9脂

A B 3讨论

SCD是从乳腺和脂肪组织中发现的一种可以

催化合成单不饱和脂肪酸的关键微粒体酶，在脂

9］

肪合成和氧化过程中起调控作用［8，。有研究表明

高效表达外源SCD1基因可诱导细胞内的c9t11-CLA，t10c12-CLA和n-7脂肪酸水平升高［10］。

Fig.5

图5广灵驴SCD蛋白信号肽及跨膜区预测

PredictionofsignalpeptideandtransmembraneregionofSCDproteininGuanglingdonkey

图6

Fig.6

广灵驴SCD蛋白磷酸化修饰位点预测

PredictionofphosphorylationmodificationsitesofSCDproteininGuanglingdonkey

A，无规则卷曲；B，α⁃螺旋；C，延伸链；D，β⁃转角

A，Randomcoil；B，Alphahelix；C，Extendedchain；D，Betaturn

图7

Fig.7

广灵驴SCD蛋白二级结构预测

ThesecondarystructurepredictionofSCDproteininGuanglingdonkey

下脂肪的基因表达谱，发现lncRNAsXLOC_014379可能以SCD基因为靶点介入到PPAR通路，从而调节脂肪沉积。Wang等［13］对0.5和2.5岁牦牛的背最长肌及其相邻肌间脂肪组织进行全转录组分析，发现SCD的表达动态与IMF沉积的增加趋势一致，表明SCD在IMF沉积中起正向调节作用。在泌乳性状研究方面，崂山奶山羊SCD基因E368位点的hh基因型的乳糖和乳密度等指标显著高于HH和Hh基因型，等位基因h为有利等位基因。因此，SCD基因是提高乳肉品质的潜

图8

Fig.8

donkey

广灵驴SCD蛋白三级结构预测

在基因。

广灵驴SCD基因ORF长1080bp，可编码359个氨基酸，其数目与牦牛［14］、猪［15］和山羊［16］相同。同源性分析结果显示广灵驴SCD基因编码序列与其它物种的同源比率均高于80%，表明SCD基因的保守性较高，与付东海［14］的研究结果相一致。进化树和同源性比对分析表明，广灵驴与马的种属关系最近，与小鼠、大鼠的种属关系最远，这和

TertiarystructurepredictionofSCDproteininGuangling

SCD基因对肉品质和脂肪沉积有重要影响，Lim等［11］的研究发现，巴克夏猪SCD基因3′非翻译区c.*2041T>CSNP与脂肪酸组成、IMF和大理石纹等显著相关。Huang等［12］分析了2个品种猪皮

图9

Fig.9

广灵驴SCD蛋白保守结构域预测

ConservedstructuredomainpredictionofSCDproteininGuanglingdonkey

代谢中起作用［21］，因此该基因表达较广泛，本试验结果表明SCD基因在广灵驴7个组织内都有表达，证实该基因表达广泛。但在各组织中有差异，在肝脏、肺脏和皮下脂肪中表达量最高，脾脏和肾脏次之，心脏和背最长肌最低，不同组织中表达量与其功能相适应。肝脏是合成脂肪的重要场所，皮下脂肪中脂肪含量较高，因此SCD基因在肝脏和皮下脂肪中高表达，表明SCD基因与广灵驴脂肪代谢具有相关性，这与石恒波［22］对奶山羊的研

（1）1，心脏；2，肝脏；3，脾脏；4，肺脏；5，肾脏；6，背最长肌；7.皮下脂肪；（2）上标不同小写字母表示差异显著（P<0.05）；上标不同大写字母表示差异极显著（P<0.01）；上标相同字母表示差异不显著（P>0.05）

（1）1，Heart；2，Liver；3，Spleen；4，Lungs；5，Kidney；6，Longissi⁃musdorsimuscle；7，Subcutaneousfat.（2）Themarkedlydifferenceisla⁃belledbydifferentsuperscriptlowercaseletters（P<0.05）；Differentcapitallettersofsuperscriptindicateextremelysignificantdifference（P<0.01），whilethesamesuperscriptletterindicatesthatthedifferenceisnotsignificant（P>0.05）

究相一致。SCD基因在肺脏中高表达说明SCD蛋白在肺脏中发挥重要功能。有研究表明SCD基因在正常成人肺的Ⅱ型细胞中高度表达，可能在Ⅱ型细胞分化的分子调控中起作用［23］。

4结论

本试验克隆了广灵驴SCD基因，上传到Gen⁃

图10

Fig.10

donkey

SCD基因在广灵驴不同组织中的表达

Bank，登录号：MW132164。SCD蛋白存在Delta9脂肪酸去饱和酶结构域，在内质网上以跨膜形式存在，属于不稳定的碱性亲水蛋白。SCD基因在广灵驴7个组织内都表达但存在差异，表达量最高的是肝脏、肺脏和皮下脂肪，其次是脾脏和肾脏，心脏和背最长肌的表达量最低。对广灵驴SCD基因的分析有助于进一步鉴定脂肪代谢相关基因，为后续深入研究SCD基因在广灵驴脂肪沉积的作用奠定基础。

参

考

文

献

ExpressionofSCDgeneindifferenttissuesofGuangling

物种进化关系相呼应。结构域预测表明，SCD蛋白在第97~337位氨基酸处存在Delta9脂肪酸去饱和酶（Delta9-FADS-like）结构域，该结构域与SCD蛋白催化饱和脂肪酸去饱和化的功能相适应，保守结构域两端的非保守区可能是不同物种间同源性差异的主要来源。本试验对广灵驴SCD蛋白进行生物信息学预测，结果发现SCD蛋白分子质量为41.55ku，是不稳定碱性亲水蛋白。SCD蛋白没有信号肽，表明不是分泌蛋白，无卷曲螺旋，表明不是多聚体结构［17］。SCD蛋白有4个跨膜区，主要定位在内质网，说明该蛋白可能是在内质网上以跨膜的形式行驶功能。糖基化修饰是重要的蛋白质翻译后修饰，本研究发现SCD蛋白有2个N-糖基化位点和3个O-糖基化位点，这些位点可能在维持SCD蛋白的稳定性、生物活性和

19］免疫等方面发挥重要作用［18，。二级、三级结构显

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［14］

对牦牛的研究相一致。

［20］

SCD蛋白参与细胞新陈代谢

，同时在能量

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Cloning,bioinformaticsandtissuedifferentialexpressionanalysisofSCDgeneinGuanglingdonkeyGuanJiawei1，SunYutong1，QiuLixia1，LiWufeng1*，DuMin2*（1.CollegeofLifeSciences，ShanxiAgriculturalUniversity，Taigu030801，China；2.DepartmentofAnimalSciences，Wash⁃ingtonStateUniversity，Pullman99164⁃6310，USA）

Abstract：［Objective］ThepurposeofthisstudywastoclonetheCDSregionofSCDgene，todetectitsexpressionin7tissuesofGuanglingdonkeyusingavarietyoftoolsforbioinformaticsanalysis，andtoprovidetheoreticalreferenceforexploringthe

roleofSCDgeneinfatdepositionofGuanglingdonkey.［Methods］HomologousprimersofSCDgenewasdesigned，andCDSsequencewasamplifiedwithRT-PCR.FunctionalpredictionofSCDgenecodingproductswasmadebyvariousbioinformaticsmethods，andtheexpressionofSCDgenein7tissuesofGuanglingdonkeywasdetectedbyqRT-PCR.［Results］ThelengthofSCDgeneCDSofGuanglingdonkeywas1080bp，whichencoded359aminoacids.ItwassubmittedtoGenBank，andtheaccessionnumberwasobtainedasMW132164.ThecodingsequenceofSCDgeneofGuanglingdonkeyshowed99.4%，89.2%，90.7%，90.1%，89.5%，88.2%，81.2%and82.4%identitywiththatofEquuscaballus，BosTaurus，Camelusbactrianus，Susscrofa，Ovisaries，Homosapiens，MusmusculusandRattusnorvegicus，respectively.SCDproteinwasanun⁃stablealkalinehydrophilicproteinwithmolecularweightof41.55ku，isoelectricpointof9.29，instabilityindexof45.54andgrandaverageofhydrophobicityof−0.146.Therewerefourtransmembraneregionswithoutsignalpeptideandcoiledhelix，whicharemainlylocatedintheendoplasmicreticulum.SecondaryandtertiarystructurepredictionshowedthatSCDproteinwasmainlycomposedofalphahelix（40.67%）andrandomcoil（40.11%）.SCDgenewasexpressedinall7tissuesofGuan⁃glingdonkey，amongwhichtheexpressioninliver，lungsandsubcutaneousfattissueswerethehighest，andtheexpressioninheartandlongissimusdorsimusclewasthelowest.［Conclusion］TheresultsofthisstudyprovidedasolidbasisforexploringthefunctionofSCDgeneinfatdepositionofGuanglingdonkeyandimprovingthequalityofGuanglingdonkeymilkandmeatinthefuture.

Keywords：SCDgene，Guanglingdonkey，Genecloning，Bioinformaticsanalysis，Tissueexpression

（编辑：韩志强）

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