化学-生物法制备D-精氨酸和L-瓜氨酸

第１９卷第４期　２００８年１２月　化学　研究　ＶｏＩ＿１９　Ｎｏ．４　Ｄｅｅ．２００８　ＣＨＥＭＩＣＡＬ　ＲＥＳＥＡＲＣＨ　化学一生物法制备Ｄ・精氨酸和　－瓜氨酸　刘　毅，尹　翠，缑灵山，朱　炎，孙　强　（徐州医学院药学系，江苏徐州２２１００４）　摘要：在水溶液中以水杨醛为催化剂，，Ｊ精氨酸可以快速消旋为ＤＬ一精氨酸．后以ＤＬ一精氨酸为底物，利用粪链　球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）精氨酸脱亚胺酶对，Ｊ精氨酸的专一脱亚胺作用，同时制备Ｄ精氨酸和￡＿瓜氨酸，分别　以９２．３％，９４．２％的产率获得光学纯的Ｄ一精氨酸和　一瓜氨酸．　关键词：ＤＬ一精氨酸；Ｄ一精氨酸；　一瓜氨酸；化学消旋；精氨酸脱亚胺酶；酶法转化　中图分类号：０　６２３．７　文献标识码：Ａ　文章编号：１００８—１０１１（２００８　Ｊ０４—００５２—０４　Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄ・Ａｒｇｉｎｉｎｅ　ａｎｄ　Ｌ－Ｃｉｔｒｕｌｌｉｎｅ　ｂｙ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ　ＬＩＵ　Ｙｉ，ＹＩＮ　Ｃｕｉ，ＧＯＵ　Ｌｉｎｇ—ｓｈａｎ，ＺＨＵ　Ｙａｎ，ＳＵＮ　Ｑｉａｎｇ　（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｘｕｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｘｕｚｈｏｕ　２２１００４，Ｊｉａｎｇｓｕ，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ　ｐｒａｃｔｉｃａｌ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　－ａｒｇｉｎｉｎｅ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ　ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ．Ｔｈｅ　ｗｈｏｌｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｃｏｍｐｌｅｔｅｄ　ｗｉｔｈｉｎ　６　ｈ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　０．１０　ｍｏｌａｒ　ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ　ｏｆ　ｓａｌｉｃｙｌａｌｄｅｈｙｄｅ．Ｄ—ａｒｇｉｎｉｎｅ　ａｎｄ　Ｌ—ｃｉｔｒｕｌｌｉｎｅ　ｗｅｒｅ　ｐｒｏｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｍｅａｎｓ　ｏｆ　ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＤＬ—ａｒｇｉ－　ｎｉｎｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ａｒｇｉｎｉｎｅ　ｄｅｉｍｉｎａｓｅ　ｗｈｉｃｈ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｆａｅｃａｌ￣．Ｔｈｅ　ｙｉｅｌｄ　ｏｆ　ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｐｕｒｉｉｅｄ　Ｄ—ａｒｇｉｎｉｎｅ　ａｎｄ　Ｌ—ｃｉｔｆｒｕｌｌｉｎｅ　ｗａｓ　９２．３％ａｎｄ　９４．２％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．　Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＤＬ・－ａｒｇｉｎｉｎｅ；Ｄ・－ａｒｇｉｎｉｎｅ；Ｌ－・ｃｉｔｒｕｌｌｉｎｅ；ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ；ａｒｇｉｎｉｎｅ　ｄｅｉｍｉｎａｓｅ；ｅｎｚｙ－・　ｍａｔｉＣ　ｅｏｎｖｅｒｓｊｏｎ　Ｄ．精氨酸（Ｄ—Ａｒｇ）和Ｌ一瓜氨酸（Ｌ—ｃｉｔ）是重要的手性试剂和医药中间体¨Ｉ２　．Ｄ—Ａｒｇ作为多肽的组成氨　基酸具有重要的生理作用，可抑制癌症扩散，治疗生长激素过多释放造成的紊乱　Ｊ，具有抑制ＤＮＡ合成、前　列腺癌细胞增殖的功能　Ｊ．Ｌ．Ｃｉｔ是人体尿素循环的一个重要中间代谢物，用于男性性功能障碍、高血压和　冠心病等多种疾病的治疗，有助于提高机体免疫能力，且在脑血流的调节中发挥重要作用　．　Ｄ—Ａｒｇ在天然界中只有少量存在，不易通过生物发酵或化学合成方法取得．，Ｊ．ｃｉｔ虽有多种制备方法，其　中化学法容易造成产物的旋光不纯；发酵法，Ｊ　ｃｉｔ产率低，最高仅为１．７　ｇ／Ｌ，且从发酵液中提取　．ｃｉｔ的成本　较高　．作者以Ｌ—Ａｒｇ为制备Ｄ—Ａｒｇ和，Ｊ—ｃｉｔ的起始原料，通过在水杨醛催化下，Ｌ—Ａｒｇ在自身形成的碱性溶　液中进行的化学消旋，获得ＤＬ．Ａｒｇ，该消旋方法与通用的氨基酸消旋方法　（即采用低级脂肪酸为溶剂，在　醛的催化下共热消旋氨基酸）及其他氨基酸消旋方法　相比，具有不需要使用较为昂贵的有机溶剂，反应条　件简单，成本低廉，对环境友好等优点，符合绿色化学的发展要求．而后用本实验室保藏的复合诱变菌株一粪　链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｓｆａｅｕｃａｌｉｓ）ＮＪ４０２中的精氨酸脱亚胺酶对ＤＬ．Ａｒｇ进行酶法转化，分别获得高收率及高光学　纯的Ｄ．Ａｒｇ和，Ｊ—ｃｉｔ．该方法具有条件温和，转化率高，提取工艺简单，光学纯度高等优点．　收稿日期：２００８—０８～２２．　基金项目：国家技术创新基金（０２ＣＪ．１３－０１—１６）和徐州医学院院长专项人才基金（０７ＫＪＺ０７）资助项目　作者简介：刘毅（１９７２一），男，博士，从事手性药物研究．　第４期　刘毅等：化学一生物法制备Ｄ一精氨酸和Ｌ一瓜氨酸　５３　１　实验部分　１．１仪器与试剂　—Ａｒｇ购于湖北新生源生物工程股份有限公司．水杨醛（ｓａｌｉｃｙｌａｌｄｅｈｙｄｅ，ＳＡ），十六烷基三甲基溴化铵　（ＣＴＡＢ），聚乙二醇辛基苯基醚（ＯＰ），吐温－８０（Ｔｗｅｅｎ８０），二乙酰肟均为分析纯．其它试剂均为化学纯或分　析纯．　ＷＺＺ－２Ｂ数字显示自动旋光仪（管长２０　ｃｍ），上海光学物理仪器厂．Ｕ．３０００分光光度计，日本Ｈｉｔａｃｈｉ公　司．ＴＨＺ—ＣＫ空气恒温振荡器，太仓博莱特实验仪器厂．ＳＣＲ２０ＢＣ型冷冻高速离心机，日本Ｈｉｔａｃｈｉ公司．　ＷＲＳ一１型数字熔点仪，上海物理光学仪器厂．傅里叶变换红外光谱仪（４　０００～４００　ｃｍ一，ＫＢｒ压片法），美国　ＮＩＣＯＬＥＴ公司．Ｂｒｕｋｅｒ—ＤＲＸ３００型核磁共振仪（ＴＭＳ为内标，Ｄ　Ｏ为溶剂）．　１．２　Ｌ－Ａｒｇ的消旋反应　在常压回流５００　ｍＬ反应器中，加入１００　ｍｍｏｌ　Ｌ—Ａｒｇ，并用不同量的水杨醛为催化剂，在２００　ｍＬ不同的　无机酸、无机碱溶液下进行反应．各取１０　ｍＬ反应原液，用６．０　ｍｏｌ／Ｌ盐酸稀释至２０　ｍＬ，并置于冰浴中快速　冷却至２０℃，测得旋光值，以作为初始旋光值Ｏ／　．并在反应进行过程中，每间隔一定时间用相同的方法，测　得不同时间的旋光值作为Ｏｌ　．计算表观消旋率（Ｅ），公式如下：　Ｅ：　×１００％　（１）　０　１．３反应过程中精氨酸总含量的测定方法　在碱性条件下，精氨酸与坂口试剂反应生成一种橙红色的物质．利用这种特殊性质，用分光光度计测出　不同浓度的精氨酸的吸光光度值，从而可得出一定吸光光度值相对应的精氨酸浓度，具体方法见文献［９］．　１．４　ＤＬ—Ａｒｇ的制备　在常压回流５００　ｍＬ反应器中，加入１００　ｍｍｏｌ　Ｌ．Ａｒｇ，并用１０　ｍｍｏｌ的水杨醛为催化剂，在２００　ｍＬ水溶液　中进行反应．得到１５．６　ｇ白色粉状结晶ＤＬ—Ａｒｇ，收率９０％．　１．５　ＤＬ—Ａｒｇ酶法转化材料与方法　１．５．１　菌种及酶法转化反应原理　粪链球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃａｌｉｓ）ＮＪ４０２为本实验室保藏的复合诱变菌株．其产生的精氨酸脱亚胺酶能专　一地催化Ｌ—Ａｒｇ脱亚胺生成　．ｃｉｔ，而Ｄ—Ａｒｇ不被作用．具体反应过程如下：　ＤＬ—Ａｒｇｉｎｉｎｅ＋Ｈ２　Ｏ　Ｄ—Ａｒｇｉｎｉｎｅ＋Ｌ—Ｃｉｔｒｕｌｌｉｎｅ＋ＮＨ３　１．５．２培养基　斜面培养基（　Ｌ）：牛肉膏５，蛋白胨１０，氯化钠５，琼脂２０，ｐＨ　７．２；种子培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖３，牛肉膏　５，蛋白胨ｌ０，氯化钠５，磷酸二氢钾３，硫酸镁０．５，ｐＨ　７．２；发酵培养基（ｇ／Ｌ）：葡萄糖３，酵母膏１０，牛肉膏５，　蛋白胨１０，玉米浆５，氯化钠５，磷酸二氢钾３，硫酸镁０．５，Ｌ一精氨酸５，ｐＨ　７．２．　１．５．３粪链球菌发酵培养　用接种环挑取两环活化好的斜面菌种，转入装有４　ｍＬ种子培养基的试管，３７℃，振荡培养２４　ｈ．然后将　其全部倒人装有１００　ｍＬ发酵培养基的２５０　ｍＬ三角瓶中，于３７　ｏＣ，１７０　ｒ／ｍｉｎ振荡培养２０　ｈ．菌体以６　０００　ｒ／ｍｉｎ离心收集，用蒸馏水洗涤菌体１次，得湿菌，称重．　１．５．４菌体酶活测定　将湿重０．５　ｇ的粪链球菌菌体细胞，转入到２０　ｍＬ的０．５　ｍｏｌ／Ｌ　ＤＬ．Ａｒｇ溶液中（ｐＨ　６．０），３７℃，１７０　ｒ／ｍｉｎ振荡转化１　ｈ．取２　ｍＬ转化液，添加２　ｍＬ　１００　ｇ／Ｌ的三氯醋酸溶液，终止酶反应，离心去除沉淀物，上　清液按一定比例加蒸馏水稀释．采用二乙酰肟比色法　测定稀释液中的　—ｃｉｔ含量．比酶活定义为以上述　的条件下，每克湿菌体每小时所生成的￡一ｃｉｔ微摩尔数，单位为ｕ（１Ｕ＝１．０　ｔｘｍｏｌ・ｇ～・ｈ　）．　１．５．５　Ｄ—Ａｒｇ和Ｌ－Ｃｉｔ的制备　将经消旋反应得到的ＤＬ－Ａｒｇ配制成１０００　ｍＬ（ｐＨ　６．０）浓度为１００　ｇ／Ｌ的ＤＬ—Ａｒｇ溶液，加ＣＴＡＢ　０．３　ｇ，　加１０　ｇ粪链球菌ＮＪ４０２湿菌体，分装于１０只２５０　ｍＬ三角瓶中，放置于３７　ｃｌＣ，１７０　ｒ／ｍｉｎ恒温振荡器中转化，　反应至Ｌ—Ａｒｇ转化完全＿９　Ｊ．转化液离心后取出菌体．上清液用活性炭脱色过滤，滤液通过阳离子交换树脂吸　化学研究　附，分别用０．５％、５％氨水洗脱，分别收集含，Ｊ　ｃｉｔ和Ｄ．Ａｒｇ的洗脱液，浓缩干燥，得Ｌ．ｃｉｔ和Ｄ—Ａｒｇ．　Ｄ—Ａｒｇ：４６．１５　ｇ白色粉状结晶，收率９２．３％，ｅｅ值为１００％，［　］２０　＝　２７．６。，（ｃ　１．０，５　ｍｏｌ／Ｌ盐酸中），　ｍｐ　２３８　０（２（分解），　Ｈ　ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００　ＭＨｚ）：１．４５（ｍ，２Ｈ，ＣＨ２），１．４６（Ｉｎ，２Ｈ，ＣＨ　），３．０３（ｄ，Ｊ＝６．１　Ｈｚ，　２Ｈ，ＣＨ２），３．１１（ｄ，Ｊ＝３．３　Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３　３６９，３　３０１，３　０７５，２　９４６，２　８６２，１　６７８，１　６２２，　１　５５８，１　４７６，１　４２２，１　３３３　ｃｍ一．　，Ｊ—Ｃｉｔ：４７．５６　ｇ白色柱状结晶，收率９４．２％，ｅｅ值为１００％，［ＯＬ］２０＝＋２２．０。（ｃ　　２．０，１　ｍｏｌ／Ｌ盐酸中），　ｍｐ　２１６￣Ｃ（分解）．　Ｈ　ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ，３００　ＭＨｚ）：１．３３～１．５６（Ｉｎ，２Ｈ，ＣＨ　），１．６６～１．８５（Ｉｌｌ，２Ｈ，ＣＨ２），３．０２　（ｔ，Ｊ＝６．７　Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ２），３．６３（ｔ，＿，＝６．１　Ｈｚ，１　Ｈ，ＣＨ）；ＩＲ（ＫＢｒ）：３　３６１，３　３３３，３　１８７，３　０４７，２　９６５，　２　８８８，２　７５６，２　６２４，１　６７６，１　６０７，１　５５４，１　５０１，１　４１５　ｃｍ～．　２结果与讨论　２．１　不同酸碱条件对Ｌ－Ａｒｇ消旋反应速率及精氨酸总量的影响　韩媛媛等¨。　研究了Ｌ。Ａｒｇ在几种常用碱的溶液中的热稳定性，得出Ｌ．Ａｒｇ在这几种碱性溶液中随着温　度的升高精氨酸的胍基容易水解成脲．同时Ｒｉｖａｒｄ等…　利用氢氧化钡碱性水溶液制备　一鸟氨酸，说明　．　Ａｒｇ在外加的碱性溶液中并不稳定，因此为了解决Ｌ．Ａｒｇ在消旋过程中不被分解的问题，首先考察了在水杨　醛催化下，几种常用碱溶液、常用酸溶液和无外加酸碱利用Ｌ—Ａｒｇ自身形成的碱性溶液，对Ｌ—Ａｒｇ消旋率和溶　液中精氨酸总含量的影响，结果见表１．　表１　不同酸碱对Ｌ－Ａｒｇ消旋反应消旋率和收率的影响　Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ａｃｉｄｉｃ　ｏｒ　ｂａｓｉｃ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　Ｏｉｌ　ｔｈｅ　ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｉｌ　ｏｆ　Ｌ－Ａｒｇ　消旋反应条件：Ｌ－Ａｒｇ　１００　ｍｍｏｌ，水杨醛１０　ｍｍｏｌ，２００　ｍＬ反应溶液，回流　从表１可以得出，Ｌ—Ａｒｇ在自身所形成的碱性溶液中进行的消旋反应，消旋效率高且精氨酸　本没被破　坏．在外加碱溶液中进行的Ｌ—Ａｒｇ消旋反应，随着碱用量的增加及碱的强度增加，Ｌ—Ａｒｇ表观消旋率虽有提　高，但溶液中精氨酸总含量下降．同时在外加酸溶液中进行的Ｌ－Ａｒｇ消旋反应，虽然，Ｊ—Ａ　’ｇ在溶液中的总含　量基本保持不变，但Ｌ—Ａｒｇ表观消旋率较低．因此外加的常用酸对精氨酸的消旋反应基本没有影响．温度的　升高加速了Ｌ—Ａｒｇ消旋反应，但同时也使精氨酸的分解反应加快，使精氨酸在溶液中的总含量下降．可以得　出，三一Ａｒｇ消旋反应在无外加酸碱条件下，可以在水杨醛的催化下达到较好的消旋反应目的．　２．２不同水杨醛用量对Ｌ—Ａｒｇ消旋反应的影响　分别在精氨酸水溶液中加入不同量的水杨醛为催化剂，进行反应，根据公式（１）可以得到　１．　如图１所示，随着催化剂使用量的增加，将进一步加速反应，但水杨醛用量超出１０　Ｈ１ＨＩＯ］后，反应加速不　明显．氨基酸中的氨基上的氮原子对醛基的亲核加成生成Ｓｃｈｉｆ碱¨　，一般不太稳定，在碱性条件下易重新　水解转化为胺和醛．因此，在催化剂水杨醛含量较低情况下，活性中间体的浓度也较低，此时消旋反应主要　是精氨酸自身碱催化消旋反应　”　．因此选定该消旋反应合适的水杨醛（ＳＡ）用量为ｎ（ＳＡ）：ｎ（Ｌ—Ａｒｇ）＝０．１　：１．　２．３生物转化条件的确定　利用粪链球菌ＮＪ４０２的菌体中精氨酸脱　胺酶对ＤＬ．Ａｒｇ进行生物转化，其中细菌的菌龄、转化温度和　转化液的ｐＨ值对酶活和酶的热稳定性影响差别较大．作者参考文献［１４］生物转化过程　｛ｌＪ精氨酸脱亚胺酶　酶活的最佳条件进行生物转化，控制转化体系的温度为３７℃，转化液起始ｐＨ　６．０左右．经２４　ｈ精氨酸脱亚　胺酶酶法转化获得Ｄ—Ａｒｇ和，Ｊ—Ｃｉｔ．从实验结果看，反应在８　ｈ转化速度较高，１０　ｈ趋于平稳，可能原因是：精　第４期　刘毅等：化学一生物法制备Ｄ一精氨酸和Ｌ一瓜氨酸　５５　氨酸脱亚胺酶为胞内酶，随着产物　．ｃｉｔ的增多，产生底物抑制作用．为克服该问题在转化液中添加适量的　表面活性剂．如图２所示，转化液中加入吐温一８０（浓度为０．５　ｇ／Ｌ）具有较好的克服底物抑制的作用．转化液　经提取分离后，可分别以９２．３％、９４．２％理论收率获得光学纯的Ｄ—Ａｒｇ和　－Ｃｉｔ．　＼　删旺Ｉ｛　抽　甾　嚼　导　楚　０　ｆ／ｌ０ｓ　Ｓ　５　１０　１５　ｔ｛ｈ　２０　２５　ｎ（Ｌ—Ａｒｇ）＝１００　ｍｍｏｌ　图２生物转化时间对精氨酸　和Ｌ一瓜氨酸含量的影响　Ｆｉｇ．２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂｉｏｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ａｒｇｉｎｉｎｅ　ａｎｄ　Ｌ—ｃｉｔｒｕｌｌｉｎｅ　图１　不同水杨醛（ＳＡ）用量对Ｌ－Ａｒｇ　消旋率的影响　Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｏｓａｇｅ　ｏｆ　ＳＡ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ　ｏｆ￡一Ａｒｇ　结论：该方法既利用了化学反应的效率高、成本低的特点，又利用精氨酸脱亚胺酶对ＤＬ—Ａｒｇ进行生物转　化，充分利用生物酶所具有的催化专一性的优点，使Ｄ—Ａｒｇ制备路线达到高效、立体专一的特点，该方法优于　国内外相应报道，具有工业化优势，可以提高资源的利用率、减少工业废物的产生与排放．　参考文献：　［１］Ｆｒｉｅｄｍａｎ　Ｍ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，ａｎｄ　ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ｏｆＤ—ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ［Ｊ］．ＪＡｇｒｉｃ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，１９９９，４７：３４５７—３４７９．　［２］Ｈａｍａｓｅ　Ｋ，Ｍｏｒｉｋａｗａ　Ａ，Ｚａｉｔｓｕ　Ｋ．Ｄ—Ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｉｎ　ｍａｍｍａｌｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ　ｖａｌｕｅ［Ｊ］．Ｊ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ　Ｂ，２００２，７８１：７３—　９１．　Ｋｏｖ６ｃｓ　Ｍ，Ｓｃｈａｌｌｙ　Ａ　Ｖ，ＺａｒＯｎｄｉ　Ｍ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ＧＨ　ｒｅｌｅａｓｅ　ｏｆ　ｒａｔｓ　ｂｙ　ｎｅｗ　ｐｏｔｅｎｔ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ｈｏｒｍｏｎｅ—ｒｅｌｅａｓｉｎｇ　［３］　ｈｏｒｍｏｎｅ（ＧＨ—ＲＨ）［Ｊ］．Ｐｅｐｔｉｄｅｓ，１９９７，１８：４３１—４３８．　１ｗａｍｕｒａ　Ｍ，Ｅｇａｗａ　Ｓ，Ｕｃｈｉｄａ　Ｔ．Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｉｎｖａｓｉｖｅｎｅｓｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｐｒｏｓｔａｔｅ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｂｙ　ｎｅｕｒｏｐｅｐ—　［４］　ｔｉｄｅ　ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ　Ｐ　ａｎａｌｏｇｕｅｓ［Ｊ］．Ｕｒｏｌｏｇｉｃ　Ｏｎｔｏｌｏｇｙ，１９９８，４（１）：２４—２８．　［５］　王晶，赵晶．一氧化氮的生物学效应［Ｊ］．中国基层医药，２００３，１０（１２）：１３１６—１３Ｉ８．　［６］　沈淑英，管正洁，冯容保．瓜氨酸酶法生产的研究［Ｊ］．工业微生物，１９８１，４：１１—１４．　［７］　Ｙａｍａｄａ　Ｓ，Ｈｏｎｇｏ　Ｃ，Ｙｏｓｈｉｏｋａ　Ｒ．Ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｐｔｉｃａｌｌｙ　ａｃｉｔｖｅ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ［Ｊ］．Ｊ　Ｏｒｇ　Ｃｈｅｍ，１　９８３，４８：８４３—　８４６．　［８］　Ｅｂｂｅｒｓ　Ｅ　Ｊ，Ａｒｉａａｎｓ　Ｇ　Ｊ　Ａ，Ｈｏｕｂｉｅｒｓ　Ｊ　Ｐ　Ｍ．Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ　ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｐｔｉｃａｌｌｙ　ａｃｔｉｖｅ　ｏｒｇａｎｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ：ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ　ｆｏｒ　ａｓｙｍ—　ｍｅｔｉｒｃ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｌ　Ｊ　１．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３：９４１７—９４７６．　俞海青，伍时华，张克旭，等．萘酚法定量测定　一精氨酸的研究［Ｊ］．天津轻工业学院学报，２００１，３７（２）：３０—３３．　９］　ｌ０　１１　ｌ２　韩媛媛，翁连进，郭旭．，Ｊ一精氨酸在几种常见碱液中的稳定性研究［Ｊ］．化工科技，２００５，１３（３）：１１—１３．　Ｒｉｖａｒｄ　Ｄ　Ｅ，Ｃａｒｔｅｒ　Ｈ　Ｅ．Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌ—ｏｒｎｉｔｈｉｎｅ　ｆｒｏｍ　Ｌ—ａｒｇｉｎｉｎｅ［Ｊ］．Ｊ　Ａｍ　Ｃｈｅｍ　Ｓｏｃ，１９５５；７７：１２６０—１２６１．　Ｇｒｉｇｇ　Ｒ，Ｇｕｎａｒａｔｎｅ　Ｈ　Ｑ　Ｎ．Ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｒａｃｅｍｉｓａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｔ—ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｐｒｅｓｅｎｃｅ　ｏｆ　ａｌｄｅｈｙｄｅｓ［Ｊ］．Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔ，１９８３，２４：４４５７．　［１３］Ｓｍｉｔｈ　Ｇ　Ｇ，Ｒｅｄｄｙ　Ｇ　Ｖ．Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆｔｈｅ　ｓｉｄｅ　ｃｈａｉｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｒａｃｅｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｉｎ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｓｏｌｕｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｏｒｇ　Ｃｈｅｍ，１９８９，　５４：４５２９．　［１４］李加友，曹瑜，刘毅，等．Ｄ一精氨酸酶法制备工艺研究［Ｊ］．金陵科技学院学报，２００６，２２（４）：８７—９０．